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AquaSil 色譜柱怎么用,看這里就明白了

更新時間:2019-06-11      點擊次數(shù):1411
   AquaSil 色譜柱的分離其作用是在填料與流動相之間進(jìn)行的,柱子的分類是根據(jù)填料類型決定的。
  正相柱:多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種,其顆粒直徑在3-10μm的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合— CN,-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。
  反相柱:主要是以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。
  常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等,其顆粒粒徑在3-10μm之間。
  AquaSil 色譜柱的使用:
  色譜柱在使用前,至好進(jìn)行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是*條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。
  1、樣品的前處理:
  a、至好使用流動相溶解樣品。
  b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
  c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
  2、流動相的配制:
  液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
  a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
  b、流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
  c、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
  d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,至好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
  e、流動相沸點不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。
  f、在流動相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
  3、流動相流速的選擇:
  因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求*柱效,至好使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
  當(dāng)選用*流速時,分析時間可能延長??刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆?qiáng)度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
  注意:
  A、由于甲醇廉價,對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。
  B、對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相,沒有提純的己烷不得使用。用水至好使用超純水(電阻率大于18兆歐),去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì),有可能影響分析結(jié)果。
  C、含水流動相至好在實驗前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。至好加入,防止細(xì)菌生長。
  D、流動相要求使用0.45μm濾膜過濾,除去微粒雜質(zhì)。
  E、使用HPLC級溶劑配制流動相,使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,提高柱性能。

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